Latar Belakang : Lama waktu pembendungan akan menyebabkan hasil pemeriksaan menjadi meningkat atau menurun dan merusak spesimen darah. Pembendungan pembuluh darah vena yang lama akan menyebabkan hemokonsentrasi. Hemokonsentrasi akibat pembendungan vena terlalu lama menyebabkan viskositas darah menjadi tinggi. Viskositas atau kekentalan plasma dapat menyebabkan peningkatan kadar substrat seperti enzim dalam darah. Tujuan : Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh lama pemasangan tourniquet pada pengambilan darah vena terhadap hasil pemeriksaan kadar Alanine Aminotransferase (ALT). Metode : Jenis penelitian ini adalah observasi analitik dengan desain penelitian Cross Sectional. Penelitian ini menggunakan sampel serum dengan jumlah responden sebanyak 33 orang. Data primer yang diperoleh kemudian dianalisis secara deskriptif dan statistik dengan uji Paired Sample T Test. Hasil : Hasil penelitian ini menunjukkan adanya kenaikan rerata kadar Alanine Aminotransferase (ALT) seiring dengan lama waktu pemasangan tourniquet, dengan rerata lama waktu pemasangan tourniquet < 1 menit adalah 15,70 U/L. Sedangkan rerata lama waktu pemasangan tourniquet 1-2 menit adalah 17,91 U/L. Hasil analisis statistik menggunakan uji Paired Sample T Test menunjukkan nilai p (0,000) < 0,05. Kesimpulan : Terdapat perbedaan yang bermakna secara statistik hasil pemeriksaan Alanine Aminotransferase (ALT) dengan waktu pemasangan tourniquet < 1 menit dan 1-2 menit. Kata Kunci : Tourniquet, Hemokonsentrasi, Kadar Alanine Aminotransferase (ALT).