Latar Belakang: Kekeruhan dalam serum lipemik mengganggu banyak pemeriksaan laboratorium dengan metode fotometri. Partikel lipid serum lipemik menyebabkan penyebaran cahaya ke tingkat yang paling tinggi selama pembacaan pada fotometri sehingga menyebabkan hasil tidak akurat. Gold standart penanganan serum lipemik adalah ultrasentrifugasi tetapi tidak semua laboratorium memiliki alatnya. Metode presipitasi menggunakan Gamma-Siklodekstrin menjadi salah satu alternatif penanganan serum lipemik. Tujuan Penelitian: Mengetahui perbedaan dan rerata aktivitas Alanine Aminotransferase (ALT) serum lipemik tanpa dan dengan penambahan flokulan Gamma-Siklodekstrin 20% dengan inkubasi 23ºC. Metode Penelitian: Jenis penelitian adalah pra-eksperimen dengan desain penelitian One Group Pre-Post Test Design. Penelitian dilaksanakan pada bulan Maret 2025. Sampel yang digunakan sebanyak 25 serum lipemik dengan kadar Trigliserida > 300 mg/dL dari rumah sakit di Yogyakarta. Hasil dianalisis statistik menggunakan Paired Sample T-Test. Hasil Penelitian: Rerata aktivitas ALT serum lipemik tanpa penambahan flokulan Gamma-Siklodekstrin 20% sebesar 24,04 U/L sedangkan rerata aktivitas ALT serum lipemik dengan penambahan flokulan Gamma-Siklodekstrin 20% sebesar 18,74 U/L. Hasil penelitian menunjukkan ada perbedaan aktivitas Alanine Aminotransferase (ALT) serum lipemik tanpa dan dengan penambahan flokulan Gamma-Siklodekstrin (p < 0,05). Kesimpulan: Ada perbedaan aktivitas Alanine Aminotransferase (ALT) serum lipemik tanpa dan dengan penambahan flokulan Gamma-Siklodekstrin 20% inkubasi 23ºC. Kata Kunci: ALT, Gamma-Siklodekstrin, serum lipemik