Latar Belakang: Pemeriksaan kadar glukosa darah merupakan salah satu indikator penting dalam diagnosis dan pemantauan penyakit diabetes melitus. Akurasi hasil pemeriksaan dapat dipengaruhi oleh faktor preanalitik, salah satunya adalah lama pembendungan vena (venous stasis) saat pengambilan darah. Pembendungan yang terlalu lama dapat menyebabkan hemokonsentrasi, yang berpotensi meningkatkan kadar glukosa darah. Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh lama pembendungan darah vena selama 1 menit dan 3 menit terhadap kadar glukosa darah. Metode: Penelitian ini menggunakan desain One Group Posttest Design, di mana pengukuran kadar glukosa darah dilakukan setelah pemberian perlakuan berupa pembendungan selama 1 menit dan 3 menit. Sebanyak 30 responden dipilih menggunakan teknik purposive sampling. Pengambilan darah dilakukan secara berurutan, dan pemeriksaan kadar glukosa dilakukan menggunakan metode GOD-PAP (Glucose Oxidase-Peroxidase Aminoantipyrine) yang tervalidasi. Data dianalisis menggunakan uji normalitas Shapiro-Wilk, kemudian dilanjutkan dengan uji Paired Sample T-Test untuk mengetahui perbedaan kadar glukosa darah. Hasil: Rata-rata kadar glukosa darah setelah pembendungan selama 1 menit adalah 101 mg/dL, sedangkan setelah 3 menit meningkat menjadi 103 mg/dL. Hasil uji statistik menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan nilai p > 0,001, yang berarti terdapat perbedaan antara kadar glukosa pada pembendungan 1 menit dan 3 menit. Kesimpulan: Lama pembendungan darah vena berpengaruh terhadap kadar glukosa darah. Pembendungan selama 3 menit menyebabkan peningkatan kadar glukosa darah dibandingkan dengan pembendungan selama 1 menit. Oleh karena itu, penting untuk menerapkan standar waktu pembendungan yang konsisten dalam prosedur pengambilan darah di laboratorium. Kata Kunci: glukosa darah, pembendungan vena, pengambilan darah