Latar Belakang: Pemeriksaan kolesterol total sangat penting dalam deteksi dini penyakit kardiovaskular. Metode CHOD-PAP umum digunakan di laboratorium klinik. Namun, efisiensi penggunaan reagen perlu dikaji, khususnya dalam situasi terbatasnya sumber daya. Tujuan: Mengetahui apakah terdapat perbedaan hasil pemeriksaan kadar kolesterol total menggunakan metode CHOD-PAP satu resep dengan setengah resep reagen dan sampel. Metode: Penelitian ini menggunakan desain pre-eksperimental dengan pendekatan Static Group Comparison. Sampel berupa pooled serum dari 20 pasien di RSUP Dr. Sardjito diperiksa kadar kolesterol totalnya dengan dua prosedur berbeda: satu resep dan setengah resep. Data dianalisis menggunakan uji normalitas Shapiro-Wilk dan uji beda Paired Sample T-Test. Hasil: Rata-rata kadar kolesterol total dengan satu resep adalah 173,85 mg/dL dan dengan setengah resep adalah 173,2 mg/dL. Hasil uji statistik menunjukkan nilai signifikansi 0,782 (p ≥ 0,05), menandakan tidak terdapat perbedaan signifikan antara kedua metode. Selisih rerata -0,6 mg/dL berada dalam batas deviasi ±10% yang ditentukan oleh CLIA dan persen desirable bias sebesar 4% oleh Westgard Rule, yang artinya berarti tidak ada beda secara klinis. Kesimpulan: Pemeriksaan kolesterol total dengan metode CHOD-PAP menggunakan setengah resep memberikan hasil yang sebanding dengan satu resep dan dapat digunakan sebagai alternatif yang lebih efisien di laboratorium klinik. Kata Kunci: Kolesterol total, CHOD-PAP, satu resep, setengah resep, efisiensi reagen.