Latar belakang : Kolesterol merupakan komponen lemak yang berwarna putih dan berbentuk seperti lilin. Kolesterol mempunyai peranan utama yang sangat penting untuk mempertahankan kesehatan. Pemeriksaan kolesterol sangat dipengaruhi oleh makanan maka disarankan untuk puasa karena dengan puasa konsentrasi kolesterol dalam keadaan sebenarnya. Kenaikan kadar kolesterol meningkatkan risiko kasus hipertensi, semakin tinggi kadar kolesterol maka semakin tinggi terjadinya kemungkinan hipertensi. Hal ini perlu diteliti apakah ada perbedaan kadar kolesterol dalam sampel serum pasien hipertensi yang diperiksa tidak puasa dan puasa 12 jam. Tujuan penelitian : Mengetahui perbedaan kadar kolesterol dalam sampel serum pasien hipertensi yang diperiksa tidak puasa dan puasa 12 jam. Metode penelitian : Penelitian ini merupakan penelitian pra-eksperimen dengan desain penelitian the static group comparison. Hasil penelitian : Rerata Kadar kolesterol dalam sampel serum pasien hipertensi yang diperiksa tidak puasa dalah 183,625 mg/dl dan yang diperiksa puasa 12 jam adalah 171,825 mg/dl. Hasil uji statistik menunjukkan nilai Sig. (2-tailed) sebesar 0,133 yang lebih besar dari 0,05. Persentase selisih mean difference kadar kolesterol sebesar 6,42 % tidak melebihi ± 10%, persentase lower sebesar 2,137 % tidak melebihi ± 10% sedangkan persentase upper sebesar 15,871 % melebihi batas ± 10%, nilai ini melebihi batas toleransi klinis yang diperbolehkan oleh Clinical Laboratory Improvement Amendments (CLIA). Kesimpulan : Kadar Kolesterol dalam Sampel Serum Pasien Hipertensi yang Diperiksa Tidak puasa dan Puasa 12 Jam, memberikan perbedaan yang signifikan. Kata Kunci : Hipertensi, kolesterol, puasa, tidak puasa