Latar Belakang: Media yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri harus memenuhi syarat dalam kandungan nutrisi yang dibutuhkan. Bakteri membutuhkan nutrisi seperti protein dan karbohidrat yang cukup untuk tumbuh. Ubi jalar dan kacang kedelai memiliki kandungan karbohidrat dan protein yang tinggi. Selain itu ubi jalar dan kacang kedelai merupakan bahan pangan yang mudah ditemukan dan memiliki harga yang terjangkau. Tujuan: Untuk mengetahui apakah ada perbedaan pertumbuhan Eschericia coli dan Staphylococcus aureus pada media alternatif campuran tepung ubi jalar dan tepung kacang kedelai dengan media Nutrient Agar. Metode: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain Posttest Only Control Group Design. Hasil: Media alternatif kombinasi tepung ubi jalar dan tepung kacang kedelai dapat digunakan dalam pertumbuhan E. coli dan S. aureus. Media alternatif yang digunakan dibuat dengan konsetrasi sebesar 0,5. Pertumbuhan E. coli tidak terdapat perbedaan jika dibandingkan dengan media Nutrient Agar. Perbedaan signifikan terlihat pada pertumbuhan S. aureus jika dibandingkan dengan media Nutrient Agar Kesimpulan: Kombinasi tepung ubi jalar dan tepung kacang kedelai dapat digunakan sebagai media alternatif pertumbuhan bakteri Eschericia coli dan Staphylococcus aureus. Kata Kunci : Tepung, Ubi Jalar, Kacang Kedelai, Media Alternatif, Pertumbuhan Bakteri.