Latar Belakang : Streptococcus mutans merupakan salah satu spesies bakteri di dalam rongga mulut yang mempunyai kemampuan dalam proses pembentukan plak dan karies gigi. Media pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans salah satunya adalah media agar darah. Media agar darah dibuat dari blood agar base dengan penambahan darah 5-10%. Darah manusia kadaluwarsa diharapkan dapat digunakan untuk mengganti darah domba dalam pembuatan media agar darah, mengingat darah domba mahal dan sulit dalam pengadaannya. Tujuan : Mengetahui apakah ada perbedaan hasil uji viabilitas bakteri Streptococcus mutans pada media agar darah manusia donor kadaluwarsa dan media agar darah domba. Metode : Jenis penelitian ini adalah True Experiment dengan desain penelitian Posttest Only Control Group Design. Data penelitian yang dikumpulkan sebanyak 32 data. Hasil : Rata-rata jumlah koloni bakteri Streptococcus mutans yang tumbuh pada media agar darah manusia donor kadaluwarsa setelah inkubasi selama 48 jam yaitu 72,81 x 101 CFU/ml, sedangkan pada media agar darah domba sebesar 73,50 x 101 CFU/ml dengan selisih rata-rata yaitu 2.31 x 101 CFU/ml atau sebesar 3.33%. Hasil uji statistik Mann Whitney U (2 Independent Samples) menunjukkan nilai Asymp. Sig. sebesar 0,940 yang berarti tidak ada perbedaan hasil uji viabilitas bakteri Streptococcus mutans pada media agar darah manusia donor kadaluwarsa dan media agar darah domba. Kesimpulan : Tidak ada perbedaan hasil uji viabilitas bakteri Streptococcus mutans pada media agar darah manusia donor kadaluwarsa dan media agar darah domba. Kata Kunci : Uji viabilitas, Streptococcus mutans, media agar darah manusia donor kadaluwarsa, media agar darah domba.