Latar Belakang: Sampel darah sitrat untuk pemeriksaan Plasma Prothrombin Time (PPT) seharusnya langsung dikerjakan dan tidak diperkenankan dilakukan penyimpanan karena dapat mempengaruhi hasil. Banyaknya jumlah sampel dan jarak antara bangsal dengan laboratorium klinik yang cukup jauh, petugas laboratorium sering melakukan penundaan pemeriksaan PPT dengan menyimpan darah sitrat. Pemeriksaan PPT merupakan pemeriksaan untuk melihat kemampuan faktor pembekuan darah jalur ekstrinsik. Tujuan Penelitian: Untuk mengetahui pengaruh lama penyimpanan darah sitrat terhadap nilai PPT. Metode Penelitian: Sampel penelitian adalah darah sitrat mahasiswa semester VI Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Yogyakarta sebanyak 17 sampel. Masing – masing sampel dibagi 3 kelompok, kelompok 1 (segera dikerjakan), kelompok 2 (disimpan 1 jam) dan kelompok 3 (disimpan 2 jam) kemudian dilakukan pemeriksaan Plasma Protrhombin Time (PPT). Hasil dianalisis secara deskriptif dan statistik menggunakan uji One-Way ANOVA. Hasil Penelitian: Hasil diuji dengan uji One-Way ANOVA menunjukkan nilai signifikan sebesar 0,000 (<0,05). Penyimpanan darah sitrat selama 2 jam memberikan pengaruh yang signifikan terhadap nilai PPT. Kesimpulan: Ada pengaruh lama penyimpanan darah sitrat terhadap pemeriksaan PPT. Penyimpanan darah sitrat selama 2 jam berpengaruh signifikan terhadap nilai PPT. Kata Kunci: Pemeriksaan PPT, nilai PPT, penyimpanan.