Latar Belakang: Metode peremajaan secara berkala dengan cara inokulasi berulang pada agar nutrient dapat beresiko terkontaminasi yang mengakibatkan harus dilakukannya identifikasi ulang untuk memperoleh kultur standar bakteri yang murni. Teknik tersebut tidak di sarankan untuk penyimpanan jangka panjang. Teknik lain yang dapat digunakan yaitu liofilisasi yang merupakan metode pengawetan dengan teknik penyimpanan kering beku dengan menambahkan lioprotektan. Metode yang dapat digunakan untuk mengetahui kemampuan hidup dan menghitung jumlah suatu bakteri yaitu dengan perhitungan Angka Lempeng Total. Tujuan: Tujuan penelitian ini untuk mengetahui gambaran Angka Lempeng Total Pada Bakteri Escherecia coli ATCC 25922 sebelum dan sesudah diliofilisasi dan disimpan selama 30 hari pada suhu 40 C. Metode Penelitian: Penelitian ini merupakan penelitian observasional menggunakan desain penelitian Cross-sectional. Spesimen yang digunakan adalah bakteri Eschericia coli ATCC 25922 dengan menghitung Angka Lempeng Total (ALT) sebelum dan sesudah diliofilisasi dan disimpan selama 30 hari pada suhu 40 C. Hasil Penelitian: Hasil uji dianalisis secara deskriptif didapatkan hasil Rerata ALT pada Bakteri Eschericia coli ATCC 25922 sebelum dilakukan liofilisasi sebesar 7,3 x 105 CFU/ml sedangkan rerata ALT pada Bakteri Eschericia coli ATCC 25922 sesudah dilakukan liofilisasi sebesar 5,0 x 105 CFU/ml. Didapatkan selisih rerata ALT pada Bakteri Eschericia coli ATCC 25922 sebelum dan sesudah diliofilisasi sebesar 2,3 x 105 CFU/ml. Kesimpulan: Kesimpulan ini terdapat penurunan rerata ALT pada Bakteri Escherecia coli ATCC 25922 sebelum dan sesudah diliofilisasi penurunan tersebut sebesar 2,3 x 105 CFU/ml. Kata Kunci : ALT, Liofilisasi, Bakteri, Escherecia coli