Latar Belakang: Pemeriksaan kadar kolesterol Low Density Lipoprotein (LDL) merupakan salah satu pemeriksaan yang mengalami gangguan karena adanya kekeruhan pada sampel lipemik. Gold Standart penanganan serum lipemik adalah dengan ultrasentrifugasi tetapi tidak semua laboratorium memiliki alat tersebut. Metode presipitasi dengan flokulan kitosan menjadi salah satu alternatif penanganan serum lipemik. Tujuan: Mengetahui kemampuan flokulan kitosan dalam menangani serum lipemik dibandingkan dengan high speed sentrifugasi pada pemeriksaan kadar kolesterol Low Density Lipoperotein (LDL). Metode: Jenis penelitian ini adalah pra-eksperimen dengan desain penelitian One Group Pretest Posttest Control Design. Penelitian dilaksanakan pada bulan Desember 2025. Sampel yang digunakan sebanyak 20 serum lipemik tingkat ringan dan sedang dari RSUP dr. Sardjito Yogyakarta. Hasil: Rata-rata kadar kolesterol LDL sebelum penanganan sebesar 156,65 mg/dL. Setelah dilakukan penanganan menggunakan flokulan kitosan, diperoleh rata-rata kadar kolesterol LDL sebesar 148,35 mg/dL, yang menunjukkan adanya penurunan 8,3 mg/dL atau sebesar 5,66% dibandingkan sebelum penanganan. Penanganan menggunakan high speed sentrifugasi dengan nilai rata-rata kolesterol LDL 151,9 mg/dL juga menunjukkan adanya penurunan 4,75 mg/dL atau sebesar 3,12 % dibandingkan dengan nilai sebelum penanganan. Hasil uji statistik Asym Sig 0,000 (P < 0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan kadar kolesterol LDL pada serum lipemik setelah penanganan dengan high speed sentrifugasi dan flokulan kitosan. Kesimpulan: Terdapat perbedaan kadar kolesterol LDL pada serum lipemik setelah penanganan dengan high speed sentrifugasi dan flokulan kitosan. Kata kunci: Serum Lipemik, Kolesterol LDL, Kitosan, High Speed Sentrifugasi