Latar Belakang: Pemeriksaan trigliserida umumnya menggunakan metode enzimatik Glycerol 3 Phosphate Oxidase (GPO). Untuk meningkatkan efisiensi, dilakukan modifikasi dengan setengah volume reagen dan sampel. Oleh karena itu, diperlukan uji validasi agar hasil tetap akurat dan dapat dipercaya. Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui uji linieritas, uji presisi, nilai Limit of Detection (LoD), Limit of Quantitation (LoQ) pada validasi metode GPO (Glycerol 3 Phosphate Oxidase) pada pemeriksaan trigliserida dengan modifikasi setengah volume reagen dan sampel. Metode: Jenis penelitian yang digunakan adalah deskriptif analitik. Objek yang digunakan dalam penelitian ini adalah serum kontrol dengan kadar normal dan timggi. Data uji validasi pada penelitian ini diolah menggunakan SPSS dan Microsoft Excel. Hasil: Didapatkan hasil penelitian ini adalah nilai korelasi determinasi linieritas sebesar 0,9979 % yang berarti linier. Pada uji presisi nilai CV within lab kadar normal 3,78% dan kadar tinggi 5,63%, pada kadar normal memenuhi kriteria presisi namun pada kadar tinggi melebihi kriteria presisi. Pada uji LoD didapatkan hasil sebesar 4,4 mg/dl dan LoQ sebesar 13,3 mg/dl. Kesimpulan: Hasil penelitian uji validasi metode GPO (Glycerol 3 Phosphate Oxidase) pada pemeriksaan trigliserida dengan modifikasi setengah volume reagen dan sampel pada parameter linieritas memenuhi kriteria linieritas, parameter presisi pada kadar normal memenuhi presisi namun pada kadar tinggi melebihi batas toleransi presisi. Kata Kunci: GPO, linieritas, presisi, LoD, LoQ