Latar Belakang: Pemantapan Mutu Eksternal (PME) merupakan salah satu kegiatan jejaring laboratorium TB yang saat ini sudah dilakukan secara rutin. Kegiatan ini adalah uji silang (crosscheck) yang merupakan kegiatan pembacaan kembali sediaan BTA yang telah diperiksa dalam kegiatan pelayanan di laboratorium . Namun proses uji silang dilakukan dibulan keempat bahkan kelima karena banyaknya slide yang dikirim, sehingga masa simpan preparat BTA semakin lama sehingga dapat menyebabkan negatif palsu. Pewarnaan ulang yang dilakukan pada preparat yang telah diwarnai sebelumnya bertujuan untuk mewarnai kembali bakteri yang telah memudar warnanya karena penyimpanan. Tujuan Penelitian: Mengetahui Perbedaan Hasil Skor Mikroskopis Pewarnaan Ulang Ziehl-Neelsen Pada Preparat BTA Positif Sebelum Pewarnaan Ulang Ziehl-Neelsen dibandingkan dengan Setelah Pewarnaan Ulang Ziehl-Neelsen. Metode Penelitian: Jenis penelitian adalah quasi experiment dengan desain Penelitian ini menggunakan Pre-Test and Post-Test Without Control Group. Jumlah data yang diperoleh pada pemeriksaan mikroskopis BTA yaitu 45 data kemudian dianalisis secara deskriptif dan statistik dan uji distribusi data menggunakan uji Wilcoxon Signed-Rank menggunakan IBM SPSS Statistik 26. Hasil Penelitian: Hasil penelitian ini menunjukkan ada perbandingan signifikan dari preparat BTA positif sebelum pewarnaan ulang dan setelah pewarnaan ulang pada preparat yang disimpan selama 3 dan 2 bulan. Kesimpulan: Pewarnaan ulang preparat BTA positif dalam dilakukan untuk memperbaiki kualitas preparat yang telah memudar karena lama penyimpanan. Kata Kunci: BTA, TB, Uji silang, mikroskopis, Ziehl-Neelsen, Preparat BTA