Latar Belakang: Minyak imersi merupakan komponen penting dalam pengamatan mikroskopis pada lensa objektif 100x, karena membantu mengurangi pembiasan cahaya dan meningkatkan ketajaman gambar. Namun, minyak imersi komersial memiliki beberapa kekurangan. Hal ini mendorong pencarian bahan alternatif yang lebih baik dari minyak komersial. Berdasarkan hal tersebut, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui apakah minyak bunga matahari dapat digunakan sebagai alternatif pengganti minyak imersi dalam pengamatan mikroskopis sediaan bakteri Gram positif dan Gram negatif. Tujuan: Untuk mengetahui apakah minyak bunga matahari dapat digunakan sebagai alternatif pengganti minyak imersi untuk pengamatan sediaan mikroskopis bakteri Gram positif dan Gram negatif Metode: Jenis penelitian yang digunakan pada penelitian ini adalah pre-experiment design karena masih terdapat variabel luar yang ikut berpengaruh terhadap terbentuknya variabel terikat. Sampel berupa preparat sediaan bakteri Gram positif dan negatif yang diamati menggunakan minyak bunga matahari dan minyak imersi. Hasil: Hasil penelitian menunjukkan bahwa minyak bunga matahari memberikan kualitas pengamatan mikroskopis yang sebanding dengan minyak imersi pada preparat bakteri Gram positif dan negatif dengan rata-rata skor pengamatan yang sama, yaitu 3 pada sediaan Gram positif, serta 2,9 pada sediaan Gram negatif. Kesimpulan: Minyak bunga matahari dapat digunakan sebagai alternatif pengganti minyak imersi untuk pengamatan mikroskopis sediaan bakteri. Kata Kunci: minyak bunga matahari, minyak imersi, pengamatan mikroskopis, bakteri Gram, alternatif.