Latar Belakang: Alanin Aminotransferase (ALT) merupakan enzim yang ditemukan pada kadar tinggi di jaringan hati. Pemeriksaan Alanin Aminotransferase (ALT) metode kinetik secara sampel start harus membuat reagen kerja. Reagen kerja yang dibuat berlebih akan disimpan. Lama dan suhu penyimpanan reagen kerja akan mempengaruhi hasil pemeriksaan. Tujuan: Mengetahui pengaruh penyimpanan reagen kerja pada suhu 2 - 8oC terhadap hasil pemeriksaan aktivitas Alanin Aminotrasferase (ALT). Metode: Penelitian ini merupakan penelitian pra-eksperimen dengan rancangan Static Group Comparison. Sampel dengan jumlah 7 serum normal dan 7 serum patologis diperiksa aktivitas Alanin Aminotransferase (ALT) dengan reagan kerja yang disimpan selama 2 minggu dan 4 minggu pada suhu 2 – 8oC. Uji analisis statistik dilakukan dengan uji distribusi data dan uji T-Test 2 sampel berpasangan menggunakan SPSS Version 20 for Windows. Hasil: Persentase selisih hasil pemeriksaan aktivitas Alanin Aminotransferase (ALT) menggunakan reagen kerja segera dipakai dengan reagen kerja disimpan selama 2 minggu pada kelompok sampel normal dan kelompok sampel tinggi adalah 12,2% dan 2,8%. Sedangkan, persentase selisih hasil pemeriksaan aktivitas Alanin Aminotransferase (ALT) menggunakan reagen kerja segera dipakai dengan reagen kerja disimpan selama 4 minggu pada kelompok sampel normal dan kelompok sampel tinggi adalah 20,8% dan 0,4%. Hasil penelitian menunjukkan ada pengaruh penyimpanan reagen kerja pada suhu 2 – 8oC terhadap hasil pemeriksaan aktivitas Alanin Aminotransferase (ALT). Kesimpulan: Ada pengaruh penyimpanan reagen kerja pada suhu 2 – 8oC terhadap hasil pemeriksaan aktivitas Alanin Aminotransferase (ALT) sehingga reagen kerja tidak dapat dipakai setelah disimpan 2 minggu. Kata Kunci: Lama Penyimpanan, Reagen Kerja, Alanin Aminotransferase