Pengambilan sampel darah dengan volume darah yang kurang dari 3 mL menyebabkan perbandingan rasio antara antikoagulan K2EDTA dengan volume darah,tidak tepat sehingga dapat memberikan hasil yang tidak akurat karena dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan hematologi. Mengetahui adanya perbedaan variasi volume darah pada tabung vacutainer antikoagulan K2EDTA terhadap nilai indeks eritrosit. Jenis penelitian ini adalah observasional dengan desain Cross-sectional. Penelitian dilaksanan pada bulan November 2022. Sampel penelitian adalah Petugas Laboratorium RSUD Siti Fatimah Provinsi Sumatera Selatan dengan teknik sampling menggunakan purposive sampling. Jumlah responden 14 orang yang diambil darah vena sebanyak 6 mL menggunakan tabung K2EDTA lalu dibagi menjadi 3 kelompok volume darah yaitu tabung 1 berisi 3 mL, tabung 2 berisi 2 mL, tabung 3 berisi 1 mL. kemudian di periksa nilai indeks eritrosit berupa MCV, MCH, dan MCHC diperoleh 42 data menggunakan alat otomatis Hematology analyzer Sysmex XN-350. Kemudian dianalisis dengan One-Way ANOVA menggnakan spss 22.0 for windows.Hasil penelitian menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan. Analisis statistik menunjukkan p ≥ 0,05 yang berarti tidak ada perbedaan pada nilai MCV p (0,471), nilai MCH p (1,000), dan nilai MCHC p (0,540). Tidak adanya perbedaan yang signifikan pada pemeriksaan indeks eritrosit dengan variasi volume darah menggunakan tabung vacutainer antikoagulan K2EDTA.