Latar Belakang: Proses sentrifugasi merupakan proses penting dalam persiapan sampel dalam tahap pra-analitik. Penggunaan kecepatan sentrifugasi yang terlalu rendah dapat menyebabkan sel yang ada di dalam supernatan belum terpisah sempurna. Kecepatan sentrifugasi terlalu tinggi dapat mengakibatkan kerusakan sel yang dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan laboratorium. Tujuan Penelitian: Untuk mengetahui pengaruh kecepatan sentrifugasi terhadap kadar trigliserida dan untuk mengetahui kecepatan sentrifugasi yang optimal untuk pemisahan serum pada pemeriksaan kadar trigliserida. Metode Penelitian: Penelitian ini merupakan penelitian pra-eksperimen dengan desain penelitian posttest only design. Sampel penelitian yang digunakan adalah serum yang berasal dari 10 subjek yang dimana masing-masing sampel penelitian dibagi menjadi tiga untuk diberikan intervensi berbeda yaitu pembuatan serum dengan kecepatan sentrifugasi 2000 rpm, 3000 rpm dan 4000 rpm. Kadar trigliserida ditetapkan dengan metode GPO-PAP. Hasil Penelitian: Hasil penelitian ini menunjukkan rerata kadar trigliserida dengan perlakuan kecepatan 2000, 3000 dan 4000 rpm berturut-turut 69,50 mg/dL, 70,69 mg/dL, dan 72,56 mg/dL. Hasil analisis statistik menunjukkan rerata kadar trigliserida pada perlakuan kecepatan sentrifugasi 2000, 3000 dan 4000 rpm tidak berbeda secara signifikan (p>0,05). Hasil rerata dengan sentrifugasi kecepatan 4000 rpm memberikan hasil yang maksimal. Kesimpulan: Tidak ada pengaruh kecepatan sentrifugasi terhadap kadar trigliserida. Kecepatan sentrifugasi 4000 rpm adalah kecepatan yang direkomendasikan. Kata kunci: Sentrifugasi, Kadar Trigliserida