Latar Belakang: Vasokonstriksi oleh tourniquet yang berkepanjangan atau berlebihan saat pungsi vena dapat menyebabkan hemokonsentrasi, hemolisis dan hipoksia lokal yang berakibat pada peningkatan palsu kadar kalium dalam darah. Tujuan: Mengetahui perbedaan hasil pemeriksaan kadar kalium serum pada pembendungan vena selama 1 menit dan 2 menit. Metode: Penelitian ini adalah observasional analitik dengan desain cross sectional. Sampel pada penelitian ini yaitu serum yang berasal dari 18 mahasiswa semester 8 Prodi Sarjana Terapan Teknologi Laboratorium Medis Poltekkes Kemenkes Yogyakarta. Responden dengan nomor urut ganjil dilakukan pemasangan tourniquet selama 1 menit pada lengan kiri dan 2 menit pada lengan kanan sedangkan responden dengan nomor urut genap diperlakukan sebaliknya. Proses pengambilan darah vena menggunakan spuit 3 ml dan darah ditampung dalam tabung SST (Serum Separator Tube) yang kemudian disentrifuge untuk mendapatkan serum. Serum diperiksa kadar kaliumnya dengan metode fotometrik turbidimetri menggunakan alat fotometer Mindray BA-88A. Data primer yang diperoleh kemudian dianalisis secara deskriptif dan statistik. Hasil: Hasil penelitian menunjukkan rata-rata kadar kalium pada pembendungan vena selama 1 menit adalah 4.16 mmol/L dan rata-rata kadar kalium pada pembendungan vena selama 2 menit adalah 4.50 mmol/L. Hasil analisis statistik menggunakan Paired Samples t Test menunjukkan nilai p (0.000) < 0.05. Kesimpulan: Ada perbedaan kadar kalium serum pada pembendungan vena selama 1 menit dan 2 menit. Kata Kunci: Flebotomi, Tourniquet, Stasis Vena, Kalium Serum