Latar Belakang : Pemeriksaan Thrombin Time (TT) termasuk salah satu parameter pemeriksaan hemostasis. Pemeriksaan ini digunakan untuk menguji tahap tiga proses koagulasi yaitu perubahan fibrinogen menjadi fibrin. Hasil pemeriksaan laboratorium harus bermutu. Mutu hasil pemeriksaan TT dipengaruhi oleh faktor praanalitik salah satunya yaitu proses pengumpulan sampel seperti urutan pengisiaan tabung Natrium sitrat pada pengambilan darah sistem vacutainer. Tujuan : Untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan nilai Thrombin Time (TT) yang diperoleh dari tabung Natrium sitrat urutan pengisian pertama, kedua dan ketiga pada pengambilan darah sistem vacutainer. Metode: Jenis penelitian ini adalah pre experimental design dengan desain penelitian yang digunakan adalah Static Group Comparison. Penelitian ini menggunakan sampel berupa plasma sitrat normal dengan jumlah sampel sebanyak 17 sampel, masing – masing ditampung pada tabung Natrium sitrat urutan pengisian pertama, kedua dan ketiga pada pengambilan darah sistem vacutainer, sehingga diperoleh data sebanyak 51 data hasil pemeriksaan Thrombin Time (TT). Data yang telah diperoleh selanjutnya dianalisis secara deskriptif dan statistik menggunakan uji Repeated Measures ANOVA. Hasil Penelitian : Persentase selisih hasil pemeriksaan TT pada tabung Natrium sitrat urutan pengisian pertama dengan kedua, pertama dengan ketiga dan kedua dengan ketiga berturut-turut yaitu 4,2%, 4,5% dan 1,2% . Hasil uji Repeated Measures ANOVA didapatkan p > α 0,05 dan uji lanjut (post hoc) Pairwise Comparisons menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan pada hasil pemeriksaan TT yang diperoleh dari tabung Natrium sitrat urutan pengisian pertama, kedua dan ketiga pada pengambilan darah sistem vacutainer. Kesimpulan: Tidak ada perbedaan nilai Thrombin Time (TT) pada tabung Natrium sitrat urutan pengisian pertama , kedua dan ketiga pada pengambilan darah sistem vacutainer. Kata Kunci : Urutan Pengisian Tabung, Natrium Sitrat, Pengambilan Darah, Sistem Vacutainer, Thrombin Time