Latar Belakang: Menurut data Riskesdas 2018, prevalensi nasional masalah kesehatan gigi dan mulut sebesar 57,6% dan proporsi menyikat gigi yang baik dan benar hanya sebesar 2,8%. Berdasarkan studi pendahuluan di SD Negeri Muhammadiyah Banyuraden, 70% siswa kelas III belum mengetahui cara menyikat gigi yang baik dan benar, 65% siswa belum pernah memeriksakan giginya ke dokter gigi dan 70% siswa mengalami masalah kesehatan gigi dan mulut seperti karies, rampan, radix dan sebagainya. Permainan Uno Stacko merupakan permainan balok bersusun yang banyak dimainkan saat berkumpul dengan keluarga atau teman. Permainan ini memiliki kelebihan merangsang daya pikir anak, merangsang perkembangan emosi, perkembangan fisik dan perkembangan sosial. Tujuan Penelitian: Mengetahui pengaruh media permainan Uno Stacko tentang menyikat gigi terhadap tingkat pengetahuan menyikat gigi siswa sekolah dasar. Metode Penelitian: Penelitian ini adalah quasi eksperimen dengan rancangan pretest-posttest with control group design. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan April 2020. Populasi studi penelitian ini adalah siswa kelas V SD Negeri Muhammadiyah Banyuraden, Yogyakarta. Sampel penelitian dengan jumlah 56 siswa. Analisis penelitian menggunakan Wilcoxon Test dan Mann-Whitney Test. Hasil Penelitian: Persentase selisih tingkat pengetahuan menyikat gigi dengan kategori baik pada kelompok eksperimen adalah 64,3% dan kelompok kontrol 39,3%. Hasil analisis dengan uji Wilcoxon Test menunjukkan kedua kelompok memiliki perbedaan bermakna dengan nilai p=0,00 (p<0,05). Analisis menggunakan Mann-Whitney Test menunjukkan bahwa mean rank kelompok eksperimen 35,52 > 21,48 pada kelompok kontrol. Kesimpulan: Ada pengaruh media permainan Uno Stacko tentang menyikat gigi terhadap tingkat pengetahuan menyikat gigi siswa sekolah dasar. Kata Kunci: Uno Stacko, siswa sekolah dasar, pengetahuan, menyikat gigi