Latar Belakang : Pemeriksaan thrombin time (TT) merupakan pemeriksaan hemostasis yang digunakan untuk pasien preoperasi sehingga hasil pemeriksaan bermutu. Mutu hasil pemeriksaan TT dipengaruhi oleh faktor praanalitik seperti perbandingan volume darah dan antikoagulan yang tidak tepat. Penurunan perbandingan volume darah dan antikoagulan menyebabkan pemanjangan hasil TT. Tujuan : Mengetahui pengaruh variasi perbandingan volume darah dan antikoagulan natrium sitrat 0,109 M terhadap hasil pemeriksaan TT. Metode : Jenis penelitian ini adalah True Experiment dengan rancangan Post Test Only Control Group Design. Rancangan ini terdapat kelompok kontrol atau pembanding yaitu perbandingan volume darah dan antikoagulan natrium sitrat 0,109 M 9:1 dan kelompok perlakuan atau intervensi yaitu perbandingan volume darah dan antikoagulan natrium sitrat 0,109 M 8:1, 7:1, 6:1 dan 5:1. Data dianalisis secara deskriptif dan statistik menggunakan One Way Anova. Hasil Penelitian : Persentase pemanjangan hasil pemeriksaan TT pada perbandingan volume darah dan antikoagulan natrium sitrat 0,109 M 8:1, 7:1, 6:1 dan 5:1 berturut-turut yaitu 18%, 31%, 44% dan 76%. Hasil uji One Way ANOVA didapatkan (0,000) < α 0,05 dan uji lanjut (post hoc) Tamhane’s menunjukkan ada perbedaan signifikam pada perbandingan volume darah dan antikoagulan natrium sitrat 0,109 M 8:1 atau setara dengan volume tabung vacutainer terisi 90%. Kesimpulan : Ada perbedaan hasil pemeriksaan TT dengan variasi perbandingan volume darah dan antikoagulan natrium sitrat 0,109 M. Perbandingan volume darah dan antikoagulan natrium sitrat 0,109 M 8:1 atau setara 90% sudah mampu memberi pengaruh pemanjangan hasil pemeriksaan TT. Kata Kunci : perbandingan, volume darah, antikoagulan, Natrium Sitrat, thrombin time