Latar belakang : Bakteri klebsiella pneumoniae adalah bersifat gram negatif yang menjadi agen penyebab penyakit nosokomial dan sepsis. Pertumbuhan bakteri dipengaruhi oleh ketersediaan zat besi (Fe) yang berperan dalam metabolisme dan pembelahan sel. FeCl₃ dapat digunakan sebagai sumber ion Fe³⁺ yang mendukung pertumbuhan bakteri. Penelitian mengenai pengaruh penambahan FeCl₃ terhadap jumlah koloni bakteri Klebsiella pneumoniae pada media MacConkey Agar masih terbatas. Tujuan penelitian: Mengetahui pengaruh penambahan FeCl₃ pada media Mac Conkey Agar terhadap jumlah koloni bakteri Klebsiella pneumoniae Metode Penelitian: Penelitian ini menggunakan desain eksperimen sejati atau true experimental dengan pendekatan rancangan acak lengkap (RAL). Isolat Klebsiella pneumoniae ditanam pada media MacConkey Agar dengan variasi konsentrasi FeCl₃ 0 µM, 10 µM, 30 µM, dan 50 µM, masing-masing enam kali pengulangan. Media diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam, perhitungan jumlah koloni (CFU/ml) dilakukan dengan alat colony counter. Data dianalisis menggunakan uji Shapiro-Wilk dan One Way ANOVA. Hasil Penelitian: Hasil statistik One Way ANOVA menunjukkan nilai signifikansi sebesar 0,405 (p > 0,05), yang berarti penambahan FeCl₃ pada konsentrasi 10 µM, 30 µM, dan 50 µM tidak berpengaruh signifikan terhadap jumlah koloni (CFU/mL) Klebsiella pneumoniae dibandingkan kelompok kontrol. Kesimpulan: Penambahan FeCl₃ pada media MacConkey Agar tidak berpengaruh signifikan terhadap jumlah koloni (CFU/mL) Klebsiella pneumoniae. Media MacConkey Agar standar sudah cukup efektif untuk mendukung pertumbuhan bakteri tanpa penambahan FeCl₃. Kata Kunci: FeCl₃, Klebsiella pneumoniae, MacConkey Agar, Jumlah koloni.