Latar Belakang: Umbi Bit (Beta vulgaris L) memiliki pigmen betasianin yang menghasilkan warna merah sering digunakan sebagai pewarna alami. Stabilitas pH dalam kandungan betasianin pada Bit merah mirip dengan Eosin Azure (EA) – 50 dan besar kemungkinan dapat dimanfaatkan sebagai alternatif pewarna alami sitoplasma sel epitel mukosa mulut pada teknik pewarnaan papaniculaou. Tujuan: Mengetahui apakah konsentrasi perasan umbi bit (Beta vulgaris L.) efektif dalam mewarnai sitoplasma sel epitel mukosa mulut pada teknik pewarnaan papaniculaou pada pengamatan mikroskopik. Metode: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen dengan rancangan Intact-Group Comparation. Sampel apusan epitel mukosa mulut diwarnai menggunakan perasan umbi bit dengan variasi konsentrasi 20%, 40%, 60%, 80% dan 100% setelah itu dilakukan penilaian hasil pewarnaan dengan skoring oleh obsever. Data yang diperoleh kemudian dilakukan analisis deskriptif dengan perhitungan rata-rata hasil skoring dalam bentuk tabel dan diagram batang juga dianalisis analitik menggunakan rumus persentase efektivitas selanjutnya dilakukan uji banding efektivitas variasi konsentrasi perasan umbi bit. Hasil: Pada uji banding persen efektivitas perasan Umbi Bit (Beta vulgaris L) konsentrasi 100% dengan kontrol memberikan hasil efektif, konsentrasi 80% cukup efektif, konsentrasi 60% kurang efektif dan konsentrasi 20% serta 40% tidak efektif sebagai alternatif pewarna alami Eosin Azure (EA)-50 dalam pewarnaan sitoplasma sel epitel mukosa mulut menggunakan teknik pewarnaan papaniculaou. Kesimpulan: Pada penelitian ini disimpulkan perasan umbi Bit merah (Beta vulgaris L) dapat mewarnai sel epitel mukosa mulut pada konsentrasi 100% yakni efektif dalam mewarnai inti dan sitoplasma sel epitel mukosa mulut pada variasi konsentrasi 100%. Kata Kunci: Perasan umbi Bit, Sel epitel mukosa mulut, Pewarnaan Papaniculaou