Latar Belakang : Penyimpanan sampel pasien gagal ginjal kronik dilakukan karena dikhawatirkan akan ada tambahan pemeriksaan yang tidak memungkinkan untuk pengambilan darah kembali. Serum pasien gagal ginjal kronik pre hemodialisa mengandung subtansi toksik yaitu Guanidine, dimana guanidine merupakan denaturan yang menghasilkan efek denaturasi yang kuat. Proses denaturasi yang terjadi dapat menyebabkan peningkatan atau penurunan komplek warna yang terbentuk sehingga akan mempengaruhi hasil pemeriksaan. Tujuan : Untuk mengetahui pengaruh lama penyimpanan serum pasien gagal ginjal kronik pada suhu 2–8ºC terhadap kadar bilirubin total. Metode : Pemeriksaan kadar bilirubin total pada serum pasien gagal ginjal kronik yang di simpan pada suhu 2-8 ºC dibagi menjadi 3 kelompok, yaitu kelompok segera diperiksa, diperiksa setelah simpan 4 jam dan setelah 8 jam. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan November 2023 di laboratorium klinik RSUD Sleman Yogyakarta. Jumlah responden sebanyak 40 dengan kriteria inklusi sampel tidak lisis, ikterik, dan lipemik, HbsAg dan anti HCV negatif, serta merupakan pasien gagal ginjal stadium 5. Analisis data menggunakan uji Friedman dilanjutkan uji posthoc menggunakan uji Wilcoxon. Hasil : Penelitian didapatkan rata-rata kadar bilirubin total pemeriksaan segera adalah 0,411 mg/dl, penyimpanan 4 jam adalah 0,399 mg/dl dan penyimpanan 8 jam adalah 0,405 mg/dl. Kesimpulan : Ada pengaruh signifikan lama penyimpanan serum pasien gagal ginjal kronik pada suhu 2–8ºC selama 4 jam terhadap kadar bilirubin total (p value=0,01) dan tidak ada pengaruh signifikan lama penyimpanan serum pasien gagal ginjal kronik selama 8 jam terhadap kadar bilirubin total (p value=0,06). Kata Kunci : Bilirubin total, Denaturasi, Penyimpanan sampel.