Latar Belakang: Ruang operasi dapat menjadi sumber utama infeksi nosokomial yang disebabkan bermacam-macam mikroorganisme, sehingga Standar pencegahan infeksi sangat penting diterapkan di ruang operasi, mengingat adanya kontak dengan darah dan cairan tubuh pasien, yang meningkatkan pajanan dari pasien ke petugas perioperatif. Rendahnya kepatuhan tenaga kesehatan disebabkan karena kurangnya pengetahuan terutama tentang kewaspadaan standar dalam pengelolaan limbah sehingga tujuan dari penelitian ini untuk membuktikan hubungan pengetahuan tenaga kesehatan tentang kewaspadaan standar: pengelolaan limbah dengan kepatuhan dalam pengelolaan limbah di Instalasi Bedah Sentral. Metode Penelitian: Jenis penelitian yang digunakan adalah kuantitatif analitik observasional (non eksperimen), dengan desain penelitian Fisher’s Exact , metode sampling yang digunakan adalah total sampling. Sampel yang diambil sebanyak 37 tenaga kesehatan di Instalasi Bedah Sentral RSUD Wates yang terdiri dari perawat anestesi, perawat bedah, dokter anestesi, dan dokter bedah pada bulan April 2018. Instrument penelitian yang digunakan adalah lembar kuesioner dan observasi. Setelah ditabulasi data maka dilakukan uji Fisher’s Exact dengan tingkat kemaknaan 0,05. Pembahasan: Hasil penelitian menunjukkan hasil bahwa pengetahuan responden dengan kategori baik ada 34 orang (91,9%), dan kategori kurang ada 3 orang (8,1%). Untuk frekuensi kepatuhan yang dikategorikan patuh ada 22 orang (59,5%) dan kategori tidak patuh ada 15 orang (40,5%). Sedangkan nilai tabulasi pengetahuan dengan kepatuhan kategori baik dan patuh 21 orang(56,8%), kategori kurang baik dan tidak patuh 2 orang (5,4%). Berdasarkan hasil uji Fisher’s Exact diperoleh hasil tidak ada hubungan pengetahuan tenaga kesehatan tentang kewaspadaan standar: pengelolaan limbah dengan kepatuhan dalam pengelolaan limbah dengan nilai signifikansi p-value 0,554 (p> 0,05). Kesimpulan: Tidak ada hubungan pengetahuan tenaga kesehatan tentang kewaspadaan standar: pengelolaan limbah dengan kepatuhan dalam pengelolaan limbah. Kata Kunci: Pengetahuan, kepatuhan, pengelolaan limbah